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太阳集团娛乐城72779提供全面的药效学(PD)研究服务,支持体内药效研究。

  • 通过流式细胞术(flow cytometry)分析细胞表面或内部的标志物来分析肿瘤或其他组织的免疫细胞变化

  • 单个或多重细胞因子/趋化因子分析

  • RNA 表达分析

  • 免疫组化分析(IHC)

  • RO(受体占用率)测定

案例1:B-hCD137(4-1BB)小鼠的MC38模型分析肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)

肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphoeytes,TILs)是近年来肿瘤免疫研究中较活跃的一类抗瘤效应细胞。它们主要由单核细胞和多核免疫细胞组成(即:T、B、NK细胞,巨噬细胞,中性粒细胞,DC细胞,肥大细胞,嗜酸性、嗜碱性粒细胞,等等)。有些细胞促进肿瘤生长,有些则抑制肿瘤生长,如下图1所示。它们的组成因肿瘤类型和治疗方法的不同而不同。肿瘤浸润淋巴细胞的组成对于揭示肿瘤生长调控的细胞机制具有重要意义。治疗干预后特定细胞类型的改变也可以作为药效学(PD)标志物。

太阳集团娛乐城72779已经建立起基于多色流式细胞术和多种同源小鼠模型(人源化小鼠、重度免疫缺陷小鼠等)的肿瘤浸润免疫细胞分析服务,包括TIL分析,可为全球药企和临床研究机构提供优质服务。


癌症

B-h4-1BB小鼠肿瘤浸润免疫细胞的典型流式细胞术分析方案


典型流式细胞仪

流式细胞术进行TILs分析。将小鼠结肠癌MC38细胞(5×105)皮下移植到B-h4-1BB小鼠(人4-1BB胞外结构域替换掉小鼠胞外结构)体内,待肿瘤体积约为300±50 mm3时开始分组(n=3)和给药。第0天以3 mg/kg的剂量给药抗人4-1BB抗体(Ab1, Ab2)后2-4天收集肿瘤组织进行TIL分析。

抗体Ab1处理组,Treg细胞明显减少,CD8/Treg比值升高,在CD4、CD8、Treg和CD11b细胞中4-1BB的表达也明显下降。而经抗体Ab2处理后,Treg细胞含量或CD8/Treg比值无变化,CD4和Treg中4-1BB表达变化较小,CD11b+细胞中4-1BB表达显著降低。结果表明,Ab1通过减少肿瘤中Treg细胞数量,对MC38肿瘤具有更好的抗肿瘤PD特征。

1.Luen SJ,Savas P,Fox SB等,“肿瘤浸润淋巴细胞和免疫疗法在乳腺癌中的新兴作用”。病理学。2017; 49(2):141-155。


案例2:B-hCD40小鼠的细胞因子分析

细胞因子是由多种细胞产生的一组低分子量可溶性蛋白。它们包括白介素,干扰素,趋化因子,肿瘤坏死因子等,在调节人体的免疫反应中起重要作用。 CD40是主要在抗原呈递细胞(APC)中表达的共刺激受体,其与T细胞上表达的配体CD154(CD40L)结合或激动性抗CD40抗体结合导致APC和T细胞的活化,并产生多种细胞因子。 太阳集团娛乐城72779自主开发了B-hCD40小鼠(鼠CD40胞外域被人CD40胞外域取代),并利用抗人CD40抗体selicrelumab在小鼠MC38肿瘤模型(A,B)中进行了体内药效研究验证。用其他抗人CD40抗体治疗的MC38 / B-hCD40模型中的多细胞因子分析结果表明,这些抗体的细胞因子表达也不同(C)。细胞因子介导的毒性是基于CD40治疗药物开发中重要的临床安全考虑因素之一,因此,细胞因子表达分析有助于选择具有细胞因子介导的毒性降低的有效抗人CD40抗体。


鼠结肠癌

将小鼠结肠癌MC38细胞皮下移植到纯合B-hCD40小鼠体内,肿瘤体积约为150±50 mm3 (n=5)时分组。结果显示抗人CD40抗体Selicrelumab可显著抑制肿瘤生长,表明B-hCD40小鼠是进行抗人CD40抗体体内药理药效研究的优质模型。(A)肿瘤体积:平均值±SEM;(B)体重:平均值±SEM。


抗人CD40抗体处理B-hCD40小鼠的MC38结肠癌模型然后 用LEGENDplexTM(Biolegend)进行细胞因子的多重检测。 抗人CD40抗体治疗导致IFN-γ,TNF-α,MCP-1和IL-27显著增加。可以观察到两种CD40抗体具有不同的细胞因子特征。 细胞因子表达分析结果不仅可以抗人CD40抗体作用方式提供见解,还可以作为PD生物标记物,为选择安全的抗CD40治疗方案提供依据。



案例3:B-hCD3e小鼠的表征显示,淋巴细胞中CD3+ T细胞的比例是抗体诱导细胞死亡(AICD)效应的PD标志物。

B-hCD3e-小鼠

C57BL/6 (A)和B- hCD3e (B)小鼠皮下移植结肠癌MC38细胞,待肿瘤体积约150±50mm3 后分组 (n=5)。mPD-1抗体均显著抑制肿瘤生长,而hCD3e抗体显著促进B-hCD3e小鼠肿瘤生长。抗人CD3e抗体促进肿瘤生长可能是抗体治疗血液和脾脏中CD3 T细胞被清除(C),产生抗体诱导的细胞死亡(AICD)效应。结果表明,B-hCD3e小鼠对抗人CD3e调节有响应,B-hCD3e小鼠是研究抗人CD3e抗体疗法的有工具。



48h后从外周血中分离淋巴细胞,用流式细胞术(C)检测B- hCD3e小鼠血液中B细胞和T细胞的比例。抗人CD3e抗体处理组特异性CD3 T细胞比例明显下降,抗鼠CD3e、抗鼠PD-L1或IgG对照抗体没有显示T细胞的耗竭(C,右)。此外,淋巴细胞中B细胞比例没有发生变化(C,左)。这一观察结果与AICD效应结果一致。


脾表

 

表1.组和治疗信息。

小鼠品系治疗
B一hCD3eG1hCD3抗体(OKT3)
G2CD3 / CD19双特异性抗体
G3blinatuomomab
G4PBS
C57BL / 6G5mCD3抗体(145-2C11)
G6PBS

采用流式细胞术分别于24h、72h、168h检测脾脏和血液中T细胞比例。



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