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案例1:利用B-hCD40小鼠评估抗人CD40的体内有效性和安全性

案例1:利用B-hCD40小鼠评估抗人CD40的体内有效性和安全性

1. 抗人CD40抗体在B-hCD40小鼠的体内药效


抗人CD40的功效

将小鼠结肠癌MC38细胞皮下移植到纯合B-hCD40小鼠中,待肿瘤平均大小约为150±50 mm3 (n=5)时分组。结果显示Selicrelumab可以显著抑制肿瘤生长,表明B-hCD40小鼠模型是研究小鼠抗人CD40抗体体内药效的有力工具。肿瘤体积:平均值±SEM (A)体重:平均值±SEM (B)

2.通过综合分析CBC、血液化学、细胞因子分析、免疫细胞分析(流式细胞术)基于B-hCD40小鼠评价抗人CD40抗体的毒性


A.抗人CD40给药计划和治疗过程中的体重变化


评估反人类

在纯合B-hCD40小鼠中按照一定频率(红色箭头)(n=5)注射抗人CD40抗体,过程中小鼠平均体重没有显著差异。


B.抗人CD40抗体处理B-hCD40小鼠全血计数(CBC)


全血细胞计数

缩写代表缩写代表
白细胞白细胞计数MCV平均小体体积
NE#中性粒细胞计数妇幼保健平均小体血红蛋白
LY#淋巴细胞计数MCHC平均小体血红蛋白浓度
MO#单核细胞计数MPV平均血小板体积
红细胞红细胞计数PLT血小板计数
血红蛋白血红蛋白RDW红细胞分布宽度
HCT分血器

利用B-hCD40小鼠进行抗体CD40抗体药效实验2天后,进行CBC测定。


C.抗人CD40抗体处理B-hCD40小鼠的血生化测定

抗人血液化学

缩写代表说明
ALT丙氨酸转氨酶高水平表示肝损伤
AST天冬氨酸转氨酶高水平表示肝损伤
胆固醇高水平表示血液过多
CR肌酐高水平表示肾小球滤过率低
谷氨酸葡萄糖高血糖或低血糖
触发三酰基甘油高水平表示高血脂
尿素尿素高水平表示肾脏损害,肝病,糖尿病或感染

利用B-hCD40小鼠进行抗人CD40抗体体内药效评价实验两天后,取血检测血生化指标。


D.抗人CD40抗体处理B-hCD40小鼠的细胞因子分析

MC38荷瘤B-hCD40小鼠经抗人CD40抗体处理后通过LEGENDplexTM(Biolegend)进行细胞因子分析。抗人CD40抗体 Ab4和Ab5显示不同的细胞因子表达结果。 抗人CD40抗体 Ab4治疗导致多种细胞因子显著增加,包括IFN-γ,MCP-1和IL-27。 抗人CD40抗体 Ab5导致IL-10显著增加。 两种抗体均有TNF-α的适度升高。


细胞因子分析


E.经抗人CD40抗体处理的B-hCD40小鼠的免疫细胞分析


免疫细胞分析

B-hCD40小鼠经抗人CD40抗体治疗后采用流式细胞术分析免疫细胞。结果表明,经抗人CD40抗体 Ab4处理后,激活的CD4、CD8 T细胞和B细胞比例明显升高。


F.抗人CD40抗体处理B- hCD40小鼠后B细胞的激活


B淋巴细胞活化

纯合B-hCD40小鼠腹腔注射抗人CD40抗体,48h后收集腹腔和脾脏细胞,流式细胞术检测活化标志物的表达。抗人CD40 抗体Selcrelumab使脾脏和腹部B细胞激活标志物显著升高

3.基于B-hPD-1/hCD40小鼠用CBC、血生化和组织病理学评价抗人CD40抗体毒性


评估抗人CD40

缩写代表缩写代表
白细胞白细胞计数MCV平均小体体积
NE#中性粒细胞计数妇幼保健平均小体血红蛋白
LY#淋巴细胞计数MCHC平均小体血红蛋白浓度
MO#单核细胞计数MPV平均血小板体积
红细胞红细胞计数PLT血小板计数
血红蛋白血红蛋白RDW红细胞分布宽度
HCT分血器

评估抗人CD40细胞

  1. B-hPD-1/hCD40小鼠经抗人CD40抗体处理后检测CBC结果。初次给药后6天,抗体处理导致MCV、PLT、LY#降低,NE#、MPV、RDW升高。

  2. 监测抗体给药后的体重变化。没有观察到持续的体重变化。

  3. B-hPD-1/hCD40小鼠高剂量抗体组AST较对照组明显升高。30mg/kg剂量可在显微镜下观察到病理变化

  4. 肝、胆、胰腺、肠样本的H&E染色显示组织间质中混合性炎症细胞浸润增高。

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