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基于CRISPR / EGE™的基因编辑技术

CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种细菌降解入侵病毒DNA和其他外源DNA的防御机制。来源于化脓链球菌的CRISPR / Cas9系统是目前最常用的一种。

Cas9蛋白首先与crRNA和tracrRNA结合形成复合物,然后结合靶序列形成RNA-DNA复合物,最终使DNA发生双链断裂。

crRNA识别靶DNA序列,tracrRNA是保持Cas9活性的必要组件。为了简化实验室中的基因编辑流程,将crRNA和tracrRNA融合在一起制备Single Guide RNAs(sgRNAs)。可以通过用同时表达sgRNA和Cas9蛋白的质粒转染细胞来编辑靶基因。 CRISPR / Cas9技术已成功用于细菌,酵母,植物,鱼类和哺乳动物,是最有效的基因编辑技术。

利用标准的CRISPR / Cas9技术,外源DNA与目标基因之间的同源重组(HR)效率比较低。太阳集团娛乐城72779自主开发了高效的基因编辑(Extreme Genome Editing,EGE™)系统,与标准CRISPR / Cas9技术相比,可将同源重组效率提高10-20倍。使用EGE™系统进行基因编辑更快,更便捷。 EGE™技术可以精确编辑几乎任何基因组位点的DNA序列,是制备多种基因编辑大小鼠模型的理想选择。


优势:

速度快最快约2个月获得F0代阳性小鼠,5个月获得F1代小鼠
零风险在强大的生产平台的支持下,如果项目失败,客户将获得全额退款
高效率与标准CRISPR/Cas9技术相比,EGE™系统介导的同源重组效率提高了10-20倍
高质量坚持Southern blot筛选,可较大程度减少随机插入引起的后续实验风险
多样化大片段敲除,条件性敲除和基因敲入等
无物种限制细胞系,小鼠,大鼠,猪,猴子和斑马鱼等

 

服务流程:

技术危机

严格的质量控制:

Southern blot排除随机插入

对大量数据统计分析发现,基于CRISPR/Cas9技术的基因编辑课题中随机插入概率约为32%(来自打靶载体)。而在这32%中14%的随机插入无法依靠交配传代去除。排除随机插入的金标准是Southern blot检测。太阳集团娛乐城72779坚持进行Southern检测,以确保基因编辑获得的动物无随机插入。


技术严格质量控制

技术可靠性服务


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