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太阳集团娛乐城72779建设有高质量的抗体药表征分析服务团队,依托于平台全面先进的检测仪器,可以提供从抗体药物开发,先导分子筛选以及临床前申报等全方位、高质量的一站式检测服务。太阳集团娛乐城在过去的2年中,已经针对20多个靶点开发了包括各种生物活性、亲和力等生物学分析方法,并在蛋白生化表征方面积累了大量经验,以支持抗体药物的开发进程。同时团队可以根据客户的具体需求快速完成方法的转移,优化及验证。

部分分析方法举例:


表征分析类型分析项目分析方法

结合活性

蛋白质结合/抑制ELISA(EC50,IC50)
细胞结合/抑制FACS(EC50、IC50)
分子互作分析亲和力Biacore
Fc受体与补体C1q结合亲和力Biacore
一级结构完整分子量或还原/脱糖分子量LC-MS
N端及C端测序LC-MS
二硫键分析LC-MS
序列覆盖率LC-MS
PTM鉴定LC-MS
糖基化糖基化位点LC-MS
糖型分析及含量LC-MS
纯度单体,聚体纯度SEC-HPLC,SDS-PAGE,WB
非糖基化重链,小分子片段rCE-SDS
内毒素Kit
电荷异质性电荷异构体分布IEX-HPLC
PI及不同PI组分的分布CE-IEF / cIEF
稳定性变性温度Tm的测定qPCR

(1)结合活性


在筛选抗体药物的早期,采用ELISA 以及FACS方法可以帮助太阳集团娛乐城快速从大量候选分子中锁定候选分子,同时通过ELISA以及FACS技术对后选分子在蛋白水平和细胞水平的结合活性进行确认,可以将抗体药项目快速推进到体内筛选阶段。因此,太阳集团娛乐城72779表征分析服务团队建立了完备的生化分析平台。

 

CTLA-4抗体的亲和力试验


 

亲和力是判断分子间相互作用的重要参数之一,尤其是抗体药筛选阶段,亲和力是了解分子识别及生物学过程的重要指标,对于药效的评价尤其重要,因此需要对分子间相互作用进行全面的研究,包括其分子间的结合快慢,结合的强弱等等。

分子间相互作用分析,利用SPR技术测定人CTLA4(A)或食蟹猴CTLA4(B)蛋白的亲和力代表性数据。

Biacore是基于表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)技术来实时跟踪生物分子间的相互作用,而不用任何标记物的技术,是被公认的检测分子互作的金标准。与传统检测手段比较,SPR方法具有无需对样品进行标记,实时监测,灵敏度高等突出优点。

太阳集团娛乐城72779表征分析服务团队配备两台检测分子间相互作用的仪器Biacore T200以及Biacore 8K,两种仪器各有特点,相互补充,为分子间相互作用检测提供全方位快速准确的服务体系。


(2)理化性质分析


抗体药的理化性质已经成为医药工业质量控制的重要环节。它作为蛋白质样品的主要特征参数之一,在抗体药物开发的早期,是确定一种新型抗体是否能够进行后续研究活动的重要前提,是决定候选分子是否能够成药的关键步骤。

太阳集团娛乐城72779表征分析服务团队配备有Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统,Maurice毛细管电泳仪以及Waters Xevo C2-XS Qtof高分辨质谱等仪器,建立了完善的理化分析平台,用以表征开发阶段的抗体理化性质,指导抗体药下一步的开发进程。

产品生物化学和生物物理表征分析能力:

分子量分析

完整分子量

还原分子量

脱糖分子量

肽图

氨基酸序列覆盖率分析

二硫键分析

稳定性研究

快速N-糖分析

N-糖基化位点

O-糖基化位点等等

 

(3)内毒素检测


内毒素系指细菌的死体或细菌代谢产物,其主要成分是产生于革兰氏阴性菌细胞外壁层的之多糖类物质。内毒素作为一种热源,会导致生物机体产生炎症、发热等反应,所以一般涉及到细胞或动物实验时,对内毒素需要进行控制或者去除,以免对实验产生不良结果。

内毒素检测是利用鲎实际能与内毒素产生凝集反应的特点,来检测内毒素的含量。具体的检测方法是绝对定量的鲎试剂显色法,检测范围在0.1-1EU/mL。


(4)纯度鉴定


▶HPLC-SEC:利用多孔凝胶固定相,根据分子大小的差异来分离的一种液相色谱方法。HPLC-SEC在分子量大的范围内分离效果相对较好,分离时间也很短,而且操作简便快捷,数据可靠且重现性好。

▶SDS-PAGE是聚丙烯酰胺凝胶电泳中最常用的一种蛋白表达分析技术。根据待测样品中蛋白质分子量大小的不同,使其在电泳胶中分离。用于检测蛋白的表达量和分析蛋白纯度。SDS-PAGE的电泳分离度非常高,例如两个蛋白相差1KD,都可以在SDS-PAGE胶上体现出来,根据对样品处理方式的不同,SDS-PAGE分为还原SDS电泳、非还原SDS电泳。


(5)报告基因检测系统及内吞实验


生物学功能或者活性检测方法的开发是生物治疗研发过程中的挑战之一,为此太阳集团娛乐城建立了基于报告基因的报告细胞系统,可以用于高通量的筛选具有特定激活或者抑制功能的抗体药。




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